Deel 2. Effecten van extreem lage frequentie elektromagnetische velden op de remming van de tumorcellen en het mogelijke mechanisme
Spontane aggregatie van gesuspendeerde tumorcellen werd behouden en magnetische remming
verscheen .In het eerdere experiment met Raji -lymfoomcellen, de spontane aggregatie van gesuspendeerde
Tumorcellen werden vernietigd en de magnetische remming verdwenen . We hebben aangetoond dat het magnetische veld dat deed
Geen remmend effect op vrij gesuspendeerde kankercellen . in deze groep experimenten hebben we onderzocht, hebben we onderzocht
Of celcontact een rol speelde in het effect van magnetische remming op tumorgroei . geaggregeerde Raji -cellen
In clusters werden bestudeerd in een {9- dag continu-blootstellingsexperiment . De cellen werden overgebracht naar een grotere con
Tainer, terwijl het kweekmedium om de 3 dagen werd gewijzigd . "agglomerate" groep: er waren geen procedures per
Gevormd behalve voor middelgrote vervanging om de 3 dagen en overbrengen naar grotere containers . "Dispersed" Group: Prior
Aan de dagelijkse blootstelling werden de cellen met een pipetpistool geblazen om de cellen in suspensie te scheiden en de
agglomeratieve structuur .
Het initiële aantal van alle cellen was 2 × 105 . Figuur 3a laat zien dat het aantal Raji -cellen onder suspensie
Aggregatie in het magnetische veld was aanzienlijk lager dan die in de niet -blootgestelde controlegroep, terwijl
Het aantal Raji -cellen onder suspensiescheiding in het magnetische veld vertoonde geen significante verschillen
Vergeleken met de niet -blootgestelde controle . Figuur 3b toont het verschil in de remmingssnelheid van het magnetische veld
Afbeelding 2.Celgroeicurve van vrij gesuspendeerde Raji -tumorcellen in de infusie- en verandergroepen . (a) cel
Remmingscurves onder verschillende graden van de frisheid van het kweekmedium . onder de voorwaarde van cel
Dispersie, er werd geen significant verschil gevonden tussen het aantal cellen dat werd blootgesteld aan het magnetische veld en
die in de niet -blootgestelde controlegroep . (b) Remmingssnelheidcurves onder de voorwaarde van celdispersie; de
Tumorcellen werden niet geremd op blootstelling aan magnetische veld onder verschillende graden van de frisheid van de kweek
medium . (c) Spontane celclustering (rechts) en kunstmatige scheiding (links) .
Tussen de twee groepen cellen (suspensieaggregatie en ophangingsscheiding) . gaf het aan dat Raji -cellen
werden geremd door het magnetische veld onder de toestand van suspensie -aggregatie . Ondertussen waren Raji -cellen
Niet geremd door het magnetische veld onder de suspensiescheidingstoestand . Raji -cellen waren minder gevoelig voor
Magnetische remming dan hechtende cellen, en de remmingssnelheid van Raji -cellen op dag 6 was vergelijkbaar met die van A549
Cellen op dag 3. In afwezigheid van het magnetische veld, het aantal Raji -cellen in de gesuspendeerde aggregatiegroep
was significant hoger dan die in de gesuspendeerde scheidingsgroep . daarentegen bij blootstelling aan de magnetische
Veld, het aantal Raji -cellen in de gesuspendeerde scheidingsgroep was aanzienlijk hoger dan dat in de SUS
Pened Aggregation Group . Maar op dag 9 nam de magnetische remming af of verdwenen .
Het experiment om de redenen te bepalen voor de verdwijning van de remmingssnelheid op dag 9. hebben we het gebied genomen
Onderaan de container als controle om te onderzoeken of de verschillen in celclusterdichtheid veroorzaakten
De vermindering van magnetische remming (minder contact tussen cellen) en stelde de cellen bloot in de geclusterde toestand
naar een {5- mt, 20 Hz magnetisch veld gedurende 9 dagen . Het geconditioneerde medium werd om de 3 dagen gewijzigd, en de grote
Container werd vervangen . De bewerking bleef de eerste 6 dagen onveranderd . op de zesde dag van de overdracht, de
Cellen werden verdeeld in containers met verschillende basisgroottes [10- cm petri (55- cm2) schotel en {25- cm2 cultuurflask] .
De enige verandering was dat de cellen op dag 6 werden overgebracht, met behulp van de 10- cm petrischaal (55 cm2) en 25- cm2
Kolf (onder verschillende basale gebieden waren de celmassa's meer geconcentreerd) als controles . verrassend genoeg de remming
Snelheid van raji -cellen in de 25- cm2 kolf was zo hoog als 36% op dag 9. De remming van raji -cellen in de 10- cm petri
Dish (55 cm2) verdween op dag 9 (fig . 3 c) . De resultaten waren consistent met eerdere bevindingen . De reden voor
Dit resultaat moet gerelateerd zijn aan de nabijheid van de cellen (fig . 3 d) .
Afbeelding 3.Agglomeraat en verspreide remming van gesuspendeerde Raji -tumorcellen . (a) Groeicurve van gesuspendeerd
Cellen met verschillende contactstructuren toonden aan dat het aantal cellen in de groep blootgesteld aan het magnetisch
Veld was aanzienlijk anders dan die in de groep die niet werd blootgesteld aan het magnetische veld onder de toestand van
Celaggregatie . Er werd echter geen significant verschil gevonden tussen de groep blootgesteld aan het magnetische veld
en de groep niet blootgesteld aan het magnetische veld onder de voorwaarde van celspersie . (b) Structuurverschil
Remmingscurve: de geclusterde cellen hadden een significante remming, maar de gedispergeerde cellen hadden geen remming . (c) op
Dag 9, onder hetzelfde volume en verschillende basale gebieden, het aantal cellen in de groep met kleinere basale gebieden
aanzienlijk verminderd (* P<0.05, vs the no-exposure control group; * P<0.05, vs the group with different bottle
Gebied) (D) Zoals getoond in de figuur, clusteer de cellen nauwer in de kweekkolf, terwijl de cellen in de petri
Schotel werden onderaan verspreid vanwege het lage vloeistofniveau . (e) Differentiaalgroeicurve van het onderste oppervlak van
het cultuurvat op dag 9.
Membraanpotentiaal was gerelateerd aan magnetische veldremming .De experimenten op geschorst
Tumorcellen toonden aan dat het remmende effect van magnetisch veld op kankercellen werd bereikt door contact
en communicatie tussen cellen, met implicaties voor signaaloverdracht tussen cellen en ionische veranderingen
In de cel micro -omgeving . calcium, natrium, kalium en pH kits CalBryte 520 AM, SBFI AM, PBFI AM,
en BCECF AM werden gebruikt om de veranderingen in intracellulaire vrije ionen van vier soorten cellen na 3 dagen van te observeren
magnetische blootstelling om te onderzoeken of de magnetische veldonderdrukking geassocieerd was met ionisch signaal
ing . Geen veranderingen in intracellulaire natrium- en kaliumionconcentraties werden waargenomen in normale of tumor
Cellen (fig . 4 a en b) . Ook werd geen significant verschil gevonden in pH -fluorescentie -intensiteit in alle groepen cellen
behalve a549 (fig . 4 c) . Normale 293 T -cellen vertoonden een significante afname in de intracellulaire vrije calciumionen
Centratie . De vaste tumorcellen vertoonden geen significante verandering, terwijl de gesuspendeerde tumorcellen een lichte vertoonden
Verhoging van de calciumionconcentratie (fig . 4 d) .
Een verandering in de calciumionische concentratie wordt meestal weerspiegeld door een verandering in membraanpotentiaal . de
Membraanpotentiaalkit Dibac4 (3) werd gebruikt om de blootgestelde cellen op dag 3 te observeren met ΔIIF -overeenkomst
ing tot rantsoen van de intracellulaire ionenfluorescentie voor dag 3 en in eerste instantie . de hechtende cellen vertoonden significant
Hyperpolarisatie (ΔIIF 293 T -cellen: −25%, ΔIIF HEPG2 -cellen: −20%en ΔIIF A549 -cellen: −13%) . De tumorcel de tumorcel
Agglomeraten vertoonden significante depolarisatie (Δiif raji -cellen: +9%) . De vrije gesuspendeerde tumorcellen toonden aan
Geen significante depolarisatie (fig . 4 e) . Figuren S1 - S3 Toon flowcytometrie gegevens .
Afbeelding 4.Verschillen in ionensterkte en membraanpotentiaal van cellen onder 3- dag 5- mt 20- Hz magnetisch
Veldblootstelling . (a) Er werd na 3 dagen geen significant verschil gevonden in de fluorescentie -intensiteit van natriumionen
van blootstelling . (b) Er werd geen significant verschil gevonden in de fluorescentie -intensiteit van kaliumionen na natrium
Ionblootstelling gedurende 3 dagen . (c) Na 3 dagen blootstelling werd geen significant verschil gevonden in de fluorescentie
Intensiteit in alle groepen cellen behalve een 549. (d) calciumionconcentratie in de 293 T -cellen nam af, terwijl
Er werd geen significant verschil in de calciumionconcentratie waargenomen in de andere groepen . (e) Herende cellen
vertoonde significante hyperpolarisatie, tumorcelagglomeraten vertoonden significante depolarisatie en de vrijuit
Suspende tumorcellen vertoonden geen significante depolarisatie . Deze veranderingen kwamen overeen met de veranderingen in
Intracellulaire calciumionconcentraties (* P<0.05, vs the no-exposure control group).
Cellen afgescheiden stoffen in het geconditioneerde medium, dat interactie had met de magnetische
veld om tumorcellen te remmen; De stof had universele expressie en was tumorspe-
CIFIC .A549- en Raji -cellen in agglomeraten werden gedurende 3 uur onafhankelijk van het 5- mt magnetische veld blootgesteld
Bepaal of de remming van het magnetische veld gerelateerd was aan een verandering in het geconditioneerde medium in de staat
van celaggregatie . Het geconditioneerde medium werd vervolgens overgebracht om niet -blootgestelde cellen van dezelfde soort voor te voeden voor
2 dagen . Het aantal cellen in de A549 "Transfer" -groep was 4 × 105 . Het aantal cellen in de Raji "overdracht"
Groep was 8 × 105 . Het aantal cellen in de A549 -groep "moest worden overgedragen" was 2 × 105 . Het aantal cellen in
De Raji "BE overgedragen" groep was 4 × 105 . onder deze omstandigheden, de cellen in de A549 "worden overgedragen" -groep
werden significant geremd met een snelheid van ongeveer 10%, wat bijna de helft was van die van de cellen met direct
Blootstelling op dag 1 in de vloeistofinfusiegroep . De cellen in de Raji "worden overgedragen" -groep vertoonde geen remming,
Maar de cellen in de overdrachtsgroepen werden geremd vergeleken met die in de niet -blootgestelde controlegroep (Fig . 5 a
en b) .
Bovendien werden A549 en 293 T -cellen gedurende 3 uur blootgesteld aan het magnetische veld 5- MT om te bepalen of dit
geconditioneerd medium was uniek voor tumorcellen en remde normale cellen . De blootgestelde kweekmedia waren toen
Overgebracht om niet -blootgestelde cellen van de verschillende soorten gedurende 2 dagen te voeden . De resultaten toonden aan dat A549 -cellen waren
Aanzienlijk geremd in 293 T -kweekmedia . De cellen in de 293 t -overdrachtsgroep vertoonden geen remming, maar de
Cellen in alle overdrachtsgroepen werden geremd vergeleken met die in de niet -blootgestelde controlegroep (fig . 5 c en d) .
Figuur 5. geconditioneerd medium remde tumorcelgroei . (a) nadat A549 -cellen werden blootgesteld aan de magnetische
veld, het geconditioneerde medium werd gefilterd en vervangen door het niet -blootgestelde geconditioneerde medium . de
Blootgesteld geconditioneerde medium A549 had een remmend effect op de niet -blootgestelde A549 -cellen . (b) na Raji -cellen
werden blootgesteld aan het magnetische veld, het geconditioneerde medium werd gefilterd en vervangen door het niet -blootgestelde
geconditioneerd medium . Er werd geen verschil gevonden in het aantal cellen tussen de veranderingsgroepen, maar de
Aantal cellen in de veranderingsgroep was aanzienlijk lager dan die in de onbehandelde controlegroep . (c) nummer
van A549 -cellen overgebracht uit het blootgestelde 293 T -cel geconditioneerde medium verminderd in vergelijking met in vergelijking met
dat van de onbehandelde controle en niet -blootgestelde geconditioneerde medium . (d) Er werd geen significant verschil gevonden
In het aantal van 293 T -cellen in het geconditioneerde medium van A549 -cellen na blootstelling vergeleken met dat in de
onbehandelde en niet -blootgestelde groepen (* P<0.05, vs the no-exposure control group; * P<0.05,vs the no-transfer control
groep) .
We zullen de inhoud van het artikel blijven bijwerken, dus houd ons in de gaten in onze sectie Sector!